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梯度液相色譜儀梯度洗脫時(shí)為何產(chǎn)生“鬼峰”

 更新時(shí)間:2021-09-22 點(diǎn)擊量:3658
   梯度液相色譜儀是目前應(yīng)用較多的色譜分析方法,液相色譜系統(tǒng)由流動(dòng)相儲(chǔ)液體瓶、輸液泵、進(jìn)樣器、色譜柱、檢測(cè)器和記錄器組成,其整體組成類似于氣相色譜,針對(duì)其流動(dòng)相為液體的特點(diǎn)作出很多調(diào)整。
  梯度洗脫帶來(lái)的“鬼峰”來(lái)源很多,其中主要來(lái)源于流動(dòng)相和管路,幾乎都有一個(gè)共同的機(jī)制:
  當(dāng)流動(dòng)相具有較高的洗脫強(qiáng)度時(shí),流動(dòng)相中有紫外吸收的有機(jī)雜質(zhì)在柱上聚焦成組分帶,并隨后在梯度中洗脫。這些流動(dòng)相雜質(zhì)的潛在“來(lái)源”是廣泛的(如有機(jī)相中污染物,水相中污染物,緩沖鹽類,流動(dòng)相瓶和混合過(guò)程產(chǎn)生等)。其他原因包括流動(dòng)相輸送的物理或機(jī)械方面、樣品引入和固定相效應(yīng)。各種來(lái)源的鬼峰,讓鬼峰處理變得非常困難。
  在色譜分離中,縱向擴(kuò)散會(huì)增加分離組分帶寬。等度液相色譜中,盡量在縱向擴(kuò)散超出接受范圍之前洗脫。在梯度洗脫色譜,因?yàn)榱鲃?dòng)相配比的變化導(dǎo)致動(dòng)態(tài)壓縮組分帶的主動(dòng)聚焦機(jī)制(帶/峰壓縮)。梯度色譜運(yùn)行,是峰寬擴(kuò)散和聚焦同步過(guò)程的產(chǎn)物。
  聚焦機(jī)制可想象一個(gè)組分帶廣泛擴(kuò)散在高效液相色譜柱的頂部。當(dāng)施加溶劑梯度時(shí),帶后部的有機(jī)溶劑濃度總是高于帶前部。帶前的組分分子比帶后的組分分子更強(qiáng)地被固定相保留,帶后的成分分子更快移動(dòng),導(dǎo)致落后的組分分子會(huì)被更強(qiáng)的洗脫液聚集,并更快地向前移動(dòng)以趕上其余的。
  帶聚焦機(jī)制可聚焦流動(dòng)相中存在的有機(jī)雜質(zhì)。在低洗脫劑濃度下有一定保留的雜質(zhì)可能會(huì)隨著梯度逐漸聚集成峰。在充分聚焦后,流動(dòng)相鬼峰與分析物峰形接近或相同,聚焦不*時(shí),它們會(huì)變得更寬或變成其他形狀。理想梯度的液相色譜流動(dòng)相到達(dá)梯度最大,該處應(yīng)僅包含預(yù)期的溶劑和試劑,不包含其他物質(zhì)。梯度高效液相色譜分析的不只是樣品,也分析流動(dòng)相的雜質(zhì)和儀器路徑的溶劑。為了區(qū)分真實(shí)的分析物峰和這些鬼峰,必須進(jìn)行空白進(jìn)樣的檢查(溶劑空白)。

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